Construction de vecteurs d'expression poxviraux

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Leur construction suit de près celle du système "baculovirus"; trois étapes essentielles permettent d'obtenir la protéine hétérologue:

[Image]La première étape est de faire un plasmide recombinant possédant le gène viral de la thymidine kinase (tk), ainsi que le gène étranger (celui-là même que l'on veut faire exprimer) sous controle d'un promoteur viral.

[Image]  Il faut ensuite transfecter le plasmide recombinant dans des cellules infectées par le virus de la vaccine sauvage. Il peut ainsi y avoir dans cette cellule recombinaison homologue entre les séquences tk du plasmide recombiné et le virus savage. Ce phénomène genère des virus vaccine recombinants possédant le gène étranger sous contrôle du promoteur viral.

[Image]  Reste à infecter des cellules hôte afin de produire la protéine souhaitée. On peut purifier 10 à 20 µg de NGF (facteur de croissance des cellules nerveuses) à partir de 107 cellules ainsi infectées.