Les vaccins recombinants

On distingue:

- Les vaccins recombinants vivants

un virus est vecteur d'Ag (codés par une séquence intégrée au génome). On fabrique donc soi-même ses propres Ac dirigés contre un autre agent infectieux à partir de l'information contenue dans le génome viral (virus utilisé: virus de la vaccine).

- Les vaccins recombinants inertes

Il s'agit d'Ag vaccinants produits par des cellules recombinantes (CHO, S. cerevisiae, E. coli) puis purifiés et injectés à l'individu (principe de la vaccination telle qu'on la pratique).

I. Les vaccins recombinants inertes: production par micro-organismes

Le seul disponible pour l'homme est celui de l'hépatite B. Pour les animaux, deux vaccins recombinants sont disponibles: celui contre l'entérite colibacillaire du porcelet, et celui contre la leucose féline (leucémie des chats).

Traditionnellement, il fallait extraire et purifier les Ag vaccinants (enveloppes virales vides) de porteurs chroniques (Ag HBs). Il fallait donc du plasma, posant le problème de quantité disponible et de contamination possible.

L'obtention de vaccin atténué est impossible car le virus se cultive uniquement sur foie … que l'on ne sait pas cultiver!

Le virus de l'hépatite B (HBV) comporte trois structures antigéniques de surface: protéine majeure, mineure et grande protéine, mises à profit pour les vaccins.

Deux marques sont disponibles sur le marché (prix env. 130 fr. la dose):

- "Chiron-Merck" basé sur la protéine majeure S produit par S. cerevisiae. Pouvoir immunisant +.

- "Pasteur" basé sur la protéine majeure et moyenne produites dans les cellules CHO. Pouvoir immunisant ++.

II- Production de protéines recombinantes par les plantes:

Cette approche évite les risques de contamination virale et le coût de fabrication apparaît inférieur à l'emploi de fermenteurs de cellules bactériennes.

II.1- Technique de fabrication:

a) On utilise le plasmide Ti (Tumor inducing) responsable de la virulence bactérienne. Les cellules tumorales induites par l'infestation bactérienne ont intégré dans leur génome une partie de TI: le tDNA (transforming DNA). Ce fragment comportes des gènes de synthèse d'opines nécessaires à la croissance bactérienne.

Pour construire un vecteur d'expression à partir de ce plasmide Ti, il faut le "désarmer", c'est à dire préserver sa virulence (autrement dit son pouvoir transformant) mais remplacer les gènes de synthèse des opines par le gène d'intérêt que l'on souhaite exploiter.

b) Infection des tissus végétaux par:

- co-culture de protoplastes et d'Agrobacterium tumefaciens en suspension,

- culture de cellules végétales en milieu solide puis dépôt d'Agrobacterium.

- piqûre de tissus (feuille, tige …) cf. rapportDEA.html

c) Sélection des tissus ou cellules végétaux recombinants.

d) régénération de plantules.

II.2- Les protéines produites par plantes transgéniques:

Exemple d'Ac de souris produits par des plants de tabac:

a) Les chaînes lourdes et légères des Ac sont clonées dans deux vecteurs cDNA distincts sous contrôle d'un promoteur s'exprimant dans les feuilles de tabac.

b) infection de tissus végétaux par ces vecteurs

c) régénération de plants de tabac. On obtient deux lignée, exprimant dans leurs feuilles les chaînes lourdes ou légères.

d) Croisement des lignées => on obtient du tabac produisant des anticorps de souris dans ses feuilles.

Les taux d'expression sont élevés, de l'ordre de 1,3 % des protéines totales de la feuille.

III- Production par des animaux transgéniques

Il y a trois techniques de création des animaux transgéniques:

1. la microinjection du transgène dans le pronucléus mâle du zygote,

2. l'infection de l'embryon au stade 4 cellules par un rétrovirus recombinant porteur du transgène,

3. injection de cellules ES ayant subi une recombinaison homologue (pour recevoir le transgène) dans un blastocyste ou une morula.

III.1- Choix de l'animal

Il est fonction des quantités de protéine hétérologue souhaitée. Une vache en produira plus qu'une souris!

L'a1 antitrypsine humaine (lutte de l'emphysème pulmonaire) est tirée du lait de brebis. Quantités fournies ~grs/l.

Voir également: Les techniques de clonage

L'auteur: Alexandre | Sommaire |